高效液相色谱法分析药物含量

高效液相色谱法是药物分析工作中的常用方法，几乎在制剂企业已经普及。这个仪器相对来说是比较精密的，但在使用中会遇到很多问题。例如

柱压问题。柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压

的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压

稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）

之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都

属于柱压问题。

压力过高。这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，

一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。(1).首先断

开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否

自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30%

的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正

常，在检查； (2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，

则是过滤白头堵塞。处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。

如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查； (3).把色谱柱

出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，

则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在

流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下

降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如

果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，

所以尽量少用。

压力过低。压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接

口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然还有一个原因就

是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致

泵无法吸上液体。处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，

则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。

基线漂移。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的

平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下（220nm）平衡

时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原

因： 1、柱温波动。解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的

窗户或空调对着柱温箱。2、流通池被污染或有气体。解决方法：用甲醇或其他

强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用

盐酸）。3、紫外灯能量不足。解决方法：更换新的紫外灯4、流动相污染、变质

或由低品质溶剂配成。解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及

HPLC级的溶剂。5、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间。

在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。6、检测器没有设定在最大吸收波长处。

解决方法：将波长调整至最大吸收波长处7、流动相的PH值没有调节好。解决方

法：加适量的酸或碱调至最佳PH值