ELISA实验

各位朋友，我最近做ELISA实验遇到了一个问题，半个月了一直没解决掉，想来咨询一下大家的意见。

这个实验是用来检测公司生产的单抗的结合活性，包被商业购买的对应抗原，二抗是过氧化物偶联的羊抗人二抗，之前实验一直没问题，从某一天开始，就出问题了，梯度稀释的样品没有显色差异，而且空白对照也显色，后来不加样品，包被封闭完成后直接加二抗，也显色，总结就是，只要包被了抗原的地方都会显色，不包被被封闭了就不显色。然后我们做了如下探究：1、换了几只新包被抗原以及不同厂家的抗原，没有效果；2、样品稀释液换了几种，没有效果；3、封闭液换了两种，没有效果；4、二抗换了厂家，没有效果。以及所有试剂都重新配制过好几次了，现在感觉找不出原因在哪里，还希望朋友们能够提供帮助，能帮忙找到原因的，必会感谢。劳烦大家帮帮忙，谢谢。