阿尔新蓝(Alcian blue)染色
阿尔新蓝(Alcian blue)染色
一、阿尔新蓝染色原理
阿尔新蓝(Alcian blue,AB),又称阿尔辛蓝[1]、阿利新蓝[1,3,6]、阿利辛蓝[8]、阿辛蓝[5]、爱先蓝[1],是一种类铜钛花青共轭染料,最初用于纺织纤维染色[1]。
1、阳离子染料
Alcian blue 属于阳离子染料,是显示酸性黏液物质最特异的染料[2]。这种阳离子染料与酸性基团结合,即 Alcian blue 与组织内含有的阴离子基团(如羧基和硫酸根)形成不溶性复合物[1,7]。
Alcian blue 由中央含铜的酞菁环与四个异硫脲基通过硫醚键相连而成。该异硫脲基呈中度碱性,使 Alcian blue 带阳离子。Alcian blue 使碳水化合物着色的确切机制不明, 普遍认为是阳离子的异硫脲基通过静电与组织内的多聚阴离子相连。如含羧基和硫酸根的酸性黏液物质的羧基和硫酸根形成不溶性复合物,即染料分子中带正电荷的盐键和酸性黏液物质中带负电荷的酸性基团结合呈蓝色[1,7]。
2、PH
- PH = 2.5 时,组织内的羧基电离,带有一个负电荷,与 Alcian blue 中的阳离子形成盐键,使带有羧基的组织(如蛋白多糖/透明质酸以及上皮酸性黏蛋白)染色[1,7]。
- PH = 1.0 时,组织内的硫酸根电离,带有一个负电荷,与 Alcian blue 中的阳离子形成盐键,使带有硫酸根的组织(如硫酸黏液物质)染色[1,7]。
- 中性黏蛋白(如胃黏膜和 Brunner 腺体部位的中性黏蛋白)不能与 Alcian blue 反应[1,7]。
3、应用
- 成软骨实验:Alcian blue 染色液能与软骨组织内的酸性粘多糖反应呈蓝色[2],可用于软骨细胞的鉴定[3]。
- 软骨组织:对软骨组织内的酸性粘多糖的定量分析[3]。软骨深蓝色,其他成分浅蓝色或近乎无色。Alcian blue染色能够清楚地显示软骨形态潮线等结构,观察软骨组织是否有损伤。
- 酸性粘液物质:Alcian blue 染色是显示酸性粘液物质的标准方法,常用于区分粘液肉瘤(呈阳性)和脂肪肉瘤(呈阴性),也可用于新型隐球菌夹膜的染色。
- 血细胞化学染色:Alcian blue 染色对急性早幼粒细胞白血病诊断具有重要意义[5,7]。
二、阿尔新蓝染色步骤
1、石蜡切片(髓核组织),脱蜡至水,详见免疫组织化学(IHC)。
2、阿尔新蓝染色:在石蜡切片上滴加阿尔新蓝染色液(Alcian blue 8GX,购于赛业生物公司[2]),完全覆盖标本,37℃ 染色 1h[2],自来水冲洗。
- 无需使用免疫组化笔画圈,染色液可因自身表面张力而存在。
- 无需苏木精核染,苏木精核染亦呈蓝色,不易区分。
3、梯度乙醇溶液脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,同免疫组织化学(IHC)。
- 梯度脱水、透明的作用时间,或可参考[7]:85% 10s→95%Ⅰ 10s→95%Ⅱ 10s→无水乙醇Ⅰ 30s→无水乙醇Ⅱ 1min→二甲苯Ⅰ 1min→二甲苯Ⅱ 2min。
三、共染
1、PAS-AB
阿尔新蓝(Alcian blue,AB)染色可与过碘酸雪夫(Periodic acid-Schiff,PAS)共染,以鉴别 PAS 反应阳性产物是中性糖蛋白还是酸性糖蛋白。
- 过碘酸雪夫(Periodic acid-Schiff,PAS)染色,主要用来检测组织中的糖类[4]。PAS-AB 共染后,中性糖蛋白呈红色,酸性糖蛋白呈蓝色[3]。
2、阿尔新蓝-核固红染色[7]
阿尔新蓝-核固红染色中,弱硫酸化酸性粘多糖、酸性粘蛋白、透明质酸、唾液粘蛋白呈蓝色;胞核呈红色到粉丝;胞浆呈浅粉色[8]。
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参考文献
[1]标准阿利新蓝染色液(pH=2.5,试剂盒)_胞内组分及亚结构染色液_染色液_染色试剂_索莱宝-专业生化试剂网上商城 (solarbio.com)
最后编辑于 2022-06-04 · 浏览 1.5 万