经验分享 | qPCR 进阶攻略！附 5 年操作经验视频
实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）也称 QPCR ，是指在DNA 扩增反应中，以荧光化学物质测单次聚合酶链式反应 （PCR）循环后产物总量的方法。
QPCR
原理与操作
QPCR 技术实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，以特异性强、重复性好、定量准确、可实时监测等优点成为了分子生子生物学研究中常用工具。
QPCR 自1983年发明以来，经过数次更新迭代，到如今在实验中广泛运用，又经历了什么?感兴趣的同学可以查看 QPCR 发展历程：QPCR发展历程
关于 QPCR 的实验操作，有几个细节你需要知道，这份 5 年 PCR 操作经验视频，请收藏👇
QPCR
探针分类
目前，根据荧光基团在寡核苷酸探针上的不同标记形式，各种荧光PCR检测试剂盒所采用的荧光探针基本可以分为三种类型：Taqman探针、分子信标和荧光杂交探针。
关于三种荧光探针的特征比较，点击下方链接进行查询 👉 三种探针比较
当探针完整的时候，荧光被淬灭；随着 PCR 的进行，探针被Taq酶切割，5' 端报告基团游离，荧光被检测。
当分子信标为茎环结构时，荧光淬灭；PCR 变性阶段，该探针的茎部打开形成一条单链，荧光信号释放。
由于两个不同的探针必须杂交到正确的靶序列时，才能检测到荧光，因此，该方法的特异性增强。
其他 PCR 干货文章，我们附在了文章末尾，感兴趣的同学可自行学习。
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最后编辑于 2022-05-12 · 浏览 1820
