流式细胞术检测CD4、CD8

流式细胞术检测CD4、CD8

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CD4和CD8细胞

白细胞又称为免疫细胞( immune ell),包含淋巴细胞和吞噬细胞等,其中淋巴细胞是免疫系统的基本成分。

淋巴细胞包含T淋巴细胞(CD3+)、B淋巴细胞( CD3-CD19+)、NK细胞( CD3-CD16+CD56+), 其中T淋巴细胞是淋巴细胞的主要组成部分。

T淋巴细胞即胸腺依赖淋巴细胞,“thymus dependent lymphocyte”简称T细胞。

CD3+淋巴细胞指的是全T淋巴细胞,包含CD3+CD4+ 细胞(辅助/诱导T淋巴细胞)、CD3+CD8+细胞(抑制/细胞毒T淋巴细胞)、 CD4+CD45RA+/CD4+CD45RA+62L+ (CD4+T细胞纯真亚群)和CD4+CD45RA-/CD4+CD45RO+(记忆亚群)、CD28+(功能亚群)、CD38+、HLA-DR+( 激活亚群)、CD95+(凋亡亚群)等。

接下来讲一下最基础的通过流式细胞术检测小鼠外周血中CD4+和CD8+含量。

实验步骤:

1.取100μL全血加入30μL肝素钠溶液处理成抗凝血;

2.取抗凝血100ul加入FITC anti-mouse CD3 Antibody(2μL)、APC anti-mouse CD4 Antibody(1μL)、PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse CD8b.2 Antibody(1μL);

3.避光孵育30min;

4.加入红细胞裂解液2mL,轻轻吹打混匀,室温避光反应10min,以1500rpm离心5min, 弃上清;

5.加2mL PBS混匀后,1500rpm离心5min,弃上清;

6.细胞沉淀加入500ul PBS重悬后上流式仪检测。

结果展示:

CD4和CD8细胞

CD4和CD8细胞

临床意义:

1. CD3下降常见于以下几种情况:

①恶性肿瘤;

②自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等;

③先天性免疫缺陷病,如艾滋病;

④接受化疗、放疗或者使用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂。

2. CD3上升则常见于重症肌无力、慢性活动性肝炎等。

3. CD4淋巴细胞减少常见于恶性肿瘤、艾滋病、遗传性免疫缺陷病、 应用免疫抑制剂的患者。

4. CD8淋巴细胞增多常见于自身免疫病,如慢性活动性肝炎、SLE、肿瘤及病毒感染等。

5. CD4/CD8的比值做为免疫调节的一项指标,正常值约1.4~2.0,在细胞免疫功能紊乱的情况下CD4/CD8比值会出现升高或降低。CD4/CD8<1.4常见于以下几种情况:

①免疫缺陷病,如艾滋病CD4/CD8比值常小于0.5 ;

②恶性肿瘤;

③再生障碍性贫血,如某些白血病;

④某些病毒感染,如急性巨细胞病毒感染;

⑤其它的像传染性单核细胞增多症、SLE肾病、骨髓移植恢复期等。

CD4 / CD8 > 2.0常见于自身免疫性疾病,如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、1型糖尿病等。另外器官移植的排斥反应也可用CD4/CD8的比值来监测,若移植后若发生排异反应,CD4/CD8的比值较移植前会明显增加。