怎样避免组织和细胞自发荧光干扰？——超全小技巧

你相信光吗？

有了光，你才可以拥有五光十色、光彩夺目、流光溢彩、阳光灿烂的的小日子。

科研，同样如此。让我们看看效果：

免疫组化：

免疫荧光：

“光”，让文章充满了美。

但是，现实总是残酷的，总有同学抱怨实验结果不符合预期

下面就跟大家介绍一些小技巧

一、自发荧光

自发荧光是组织/细胞样本在荧光检测过程中产生的与目的信号无关的背景荧光信号。

自发荧光：

自发荧光不是抗原-抗体-荧光团相互作用的特异性着色，其诱发因素有很多：

下面是避免自发荧光干扰的小技巧，收藏保存转发吧。

自发荧光解决方案：

1. 交联固定诱发。使用非醛类固定剂，比如冰乙醇，可有效降低交联固定而诱导的自发荧光。

2. 红细胞。动物组织取材固定前，先用PBS进行灌注。

3. 先进行预实验。检测自发荧光的波长范围，再选择与自发荧光荧光信号波长相差较大荧光信号。

4. 组织自发荧光淬灭剂。自发荧光淬灭试剂中的离子可通过碰撞方式，捕获自发荧光光源分子发出的电子，阻止该电子从激发态回归基态和能量释放，从而淬灭自发荧光。需要注意的是：不同物种不同类型组织的自发荧光具有不同的特征，使用组织自发荧光淬灭剂的效果可能会有差别；另外，淬灭剂会在一定程度上降低抗体荧光强度。

二、抗体保存

抗体的选择之前我们已经讲过了，但是抗体收到之后也还有一些需要注意的事项。

1. 离心。

收到抗体，在开盖前先离心。

抗体从离开厂家到送到你手里，经历了很多颠三倒四的“磨难”，抗体有效成分不可避免的会粘附在管盖和管壁上。抗体总量已经很少了（20-100微升），不离心的话可使用量会更少。抗体很贵，要节省哦。

2. 储存条件

抗体本质上也是一种蛋白，对储存条件也有着严格的要求。

具体方法就是：参考说明书。

3.添加剂

抗体的储存需要稳定的环境，因此我们可以在抗体溶液中加入不同的添加剂以稳定抗体溶液性质。

4.分装

有很多同学喜欢分装抗体，关于这点，我们的意见是：不建议。

分装会降低抗体效价。蛋白质以高浓度保存会更加稳定，抗体溶液体积一般都很小，管壁吸附、水蒸气冷凝会使得分装后抗体的有效浓度降低，效价降低。 且分装的体积越小，效价损失越大。

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