油酸/油酸钠/BSA水溶液配置高脂细胞培养基，诱导脂肪肝细胞模型、HepG2脂滴关键点分析

近年来，我国经济的发展促使居民膳食结构由低脂肪向高脂肪模式转变，据《中国居民营养与慢性病状况调查》报道，中国成人血脂异常患病率高达39.9-40.8%。血脂异常主要表现为高甘油三酯和游离脂肪酸血症。

在体外研究中，为了模拟高甘油三酯和游离脂肪酸血症，通常需要在细胞培养基中添加高浓度的游离脂肪酸。油酸（Oleic acid）是人体内含量最丰富的游离脂肪酸，占血浆游离脂肪酸总量的31%。油酸是一种单不饱和脂肪酸。

正常情况下，人体血液中油酸的浓度维持在生理范围内，血脂异常患者血液中油酸浓度显著增高。油酸钠（Sodium oleate）是油酸的钠盐，同等摩尔浓度的油酸钠与油酸对体外培养的细胞产生相同的作用。因此，油酸或油酸钠被认为是体外模拟高甘油三酯和游离脂肪酸血症的理想试剂。

油酸呈液态，易溶于乙醇等有机溶剂中，但不溶于水；油酸钠呈固态，也难溶于水，两者均无法直接用于血脂异常相关疾病的体外研究。目前，市场上尚无即用型油酸或油酸钠细胞添加剂，加上配制方法不当，导致很多从事血脂异常相关疾病研究的科研工作者无法顺利开展体外细胞实验。

目前，有人采用甲醇、乙醇、二甲基亚砜等有机溶剂，盐酸或硫酸、氢氧化钠溶液等强酸强碱类溶剂溶解油酸或油酸钠，然而，这些溶剂既对细胞具有毒性，也不能有效溶解油酸或油酸钠。

因此，本文建议使用牛血清白蛋白（BSA）可与自由脂肪酸结合的特点，采用BSA溶液配制油酸或油酸钠。该方法的优点是溶剂本身对细胞无毒性，针对不同的细胞实验在配置过程中应摸索合适的条件，以充分溶解自由脂肪酸，确保BSA与其充分结合，使油酸或油酸钠的精确浓度可控，最后配置的BSA-自由脂肪酸应符合生理情况下的摩尔比例，避免固体析出和脂毒性发挥。

下文以HepG2人肝癌细胞为例：在诱导HepG2人肝癌细胞脂滴形成的过程中，需要采用油酸钠（sodium oleate）模拟高自由脂肪酸环境。

图中，油酸钠水溶液时间依赖性诱导HepG2人肝癌细胞脂滴形成。分别给予HepG2细胞空白对照（A）、溶剂对照（B）、油酸钠（C-D，500µM）2天（C）和3天（D）、油酸钠/棕榈酸钠（E-F，500µM/250µM）2天（E）和3天（F）。采用油红O染色后进行拍照，其中位于细胞浆中的油红O染色阳性、圆形透亮沉积物即为脂滴。

针对不同细胞种类及实验目的，油酸钠水溶液所用浓度不同，处理时间也不同。待细胞生长至80-100%汇合度时，换成新鲜含血清（一般10%）培养基，按适当浓度滴加油酸钠水溶液，对照组加入等量溶剂对照，轻柔混匀后将细胞放入细胞孵箱中继续培养。

时间有限，希望上述分享能够对大家的科研工作有所帮助。