星形胶质细胞（SVG P12）培养小心得

本人于广州吉妮欧购买永生化星形胶质细胞（SVG P12）。

开始时，细胞来的时候的状态相比于购买的其他细胞来讲，有部分漂浮细胞，咨询细胞技术，说，“部分漂浮细胞属于正常现象，ATCC上面的图片就有部分漂浮细胞”。

1.图一和图二是细胞刚刚到的时候的状态：（虽有部分细胞漂浮，但是细胞整体状态良好，细胞生长较快，细胞细胞之间没有细胞器等脏东西）

图一

图二

2.图三到图八是细胞传代以后，细胞状态变差的图片，低倍镜下可见细胞之间有不可移动的小黑点，且呈增加趋势。细胞状态较差，细胞细长，细胞长的很慢。刚刚开始细胞3天长满，后来5天-7天还没长满，可以培养十几天才长满（刚刚开始我以为需要给细胞时间，它就会长满）。后来细胞状态不太好，长到第三天细胞就全部漂浮起来了。

图三

图四

图五

图六

图七

图八

3.当然，中途有一次复苏细胞还是传代细胞之后，细胞也有污染的情况发生。实验室很多人看到我细胞，包括一起的研究生和老师，很多觉得我细胞是支原体污染或者是其他细菌的污染。

4.我也尝试在6孔板培养我所有养星形胶质细胞的液体，观察里面是否有污染。因为中途有一段时间没有养细胞，星形胶质细胞的完全培养基放在4℃冰箱几个月没用，当时也培养出了一定杂质（类似于细胞器的东西），实验室老师说，可能是细胞污染细胞。

5.我又换新的完全培养基，把我的艾本德的移液枪放入高压灭菌锅灭菌（艾本德技术人员说research plus）的移液枪是可以放入高压灭菌锅灭菌的。

6.同时，我和技术人员联系，技术人员说是因为我的操作问题，技术问题，比如胰酶消化太过等原因，并扬言到要是我们实验室养不好，我们可以免费送你们一瓶细胞，并且给你包来回的机票（意思是养的好，我就自己负担机票，而且不怪他们，剩下的我自己想办法）。

7.和技术人员咨询过程中，他告诉我了很多方法（养好细胞的方法）。这里我就不一一赘述，如有需要可以评论区留言或者私信。

8.在我遵循技术人员给我说的所有培养时需要注意的东西之后，我濒临放弃的边缘，准备舍弃掉这个细胞。就在这时，把细胞图片拿给实验室一个博士老师咨询，她的一句话我豁然开朗。她说，“你这个细胞从照片看起来就是营养不良，你用的什么血清？别人用的什么血清？我回答，“我买的完全培养基，人家里面加的应该是gibco血清，细胞状态不好的时候，我多加了5%普通血清”。细胞技术当时给我说的是，细胞状态不好的时候可以把血清增加到15%，可以用只要干净的血清就OK。（我当时以为我中乔新舟的血清可以）

9.于是，我想起来之前养别的细胞的时候，里面配套的完全培养基里面有小量澳洲进口血清，于是我重振旗鼓，又复苏了一管细胞，并多加了5%澳洲进口血清，细胞就被我养好啦。

10.谢谢你能耐心看完，也希望对养不好星形胶质细胞的人有帮助！