关于THP-1细胞培养与巨噬诱导

先上图！！！

THP-1+PMA 诱导24h

qPCR测巨噬标志物表达

CD11b表达高至55倍

这两张图的结果我期盼太久了，有半年之余，其过程有多痛苦，现在就有多开心。虽然还有很长的路要走，但是细胞养好了，也就等于高楼的第一层建扎实了。

根据各个大佬的经验，结合自己的实际情况，讲讲我是怎么养好THP-1并诱导成巨噬的。

光是养这个细胞真的是可以把我折磨得体无完肤，隔壁实验室朋友养起来蹭蹭蹭地长，到我这生长就静止了，而且常常污染，甚至每次换枪头都会自己盯着枪头看有无明显不干净的东西。可还是时常污染，甚至借了隔壁朋友的1640来养，莫名其妙，这瓶培养基真菌污染了，真的水逆。

从头学习如何养细胞，如何养悬浮细胞，如何养THP-1细胞。这里容易犯错误的地方就是没有辩证去思考别人说的话。

“标准的”THP-1培养方法：

1.  形态：小、圆、亮

2.  较敏感，更换血清或不同型号培养基需要1周时间适应，推荐进口1640，适应后不应随意更换

3.  传代：半换液，1-2周离一次，控制好密度

4.  聚团：说明细胞状态未达最佳，密度到了会自然分散

5.  复苏：复苏率偏低，量应多，恢复1-2周再实验

我感觉是基本上每个坑都踩了，急着用THP-1做实验，我换成GBC血清，养两天没见气色，又换成BI血清，还是没长。我也在园子里查了很多，也有很多人会遇到这种情况，分析来看，可能污染，细胞生长停滞，仔细检查有无污染。。。

细胞遇到报团，我等，等它向上面说的会散开，最后还是没等到。

后面找了一个朋友寄了我一瓶THP-1，在此表达我的感谢，刚拿到细胞我很开心，因为自己手底下的细胞没有长得好的，复苏的THP-1没有一个能长起来的，也试过养在隔壁培养箱里。

拿到细胞我就直接离心，分成两皿养了（隔壁实验室朋友就用大皿养），幸运的是细胞长起来了，我急着想知道它诱导成巨噬后的标志物表达情况，拿出了一部分，而不是等着多一点给它冻存起来，这是一个雷区，大家拿到细胞最好先酒精喷喷，然后培养箱内放个俩小时稳定一下细胞状态，然后长起来了一定要冻存，别急着拿细胞做实验！

这也是因为隔壁实验室朋友的THP-1标志物鉴定不太行，CD11b仅仅表达升高两三倍。所以才拓宽渠道来养THP-1。

不幸的是我细胞没来得及冻存，细胞就突然污染，那段时间在怀疑人生。迷之操作。多拜佛吧。寄的细胞测得巨噬标志物表达非常理想，因为只是群里认识的朋友，所以不太愿意再给我寄送第二次，非常能理解。

于是最近是去找了朋友的朋友要了一点THP-1，因为在同一个城市，也方便。但是这次就非常小心谨慎，不能天天看，也不能频频换血清，还要注意不被污染。这次有个特别的点就是血清它是用灭活的养，我了解到血清里面的补体确实会对单核细胞有影响，所以也继续用灭活血清(56℃ 30min)培养它。起初三天没见增多，每天都在想这个细胞，都忍不住去看，但是又要提醒自己看多了会影响它生长，看它几天都没长又心急。

就很突然，长起来了，没报团，很多，用新赛美冻存液冻了几罐，然后又用传统的100ulDMSO+900ul灭活血清梯度冻存血清，终于可以开始进行后续外泌体相关的实验了。

感谢大家看到这里，可能别人养起来不用这么费劲，但是遇到困难还是要一步步分析，然后解决。不同来源的THP-1诱导成巨噬后标志物表达情况还是会不一样的。

最后祝大家新的一年，身体健康，硕果累累！