关于慢病毒

慢病毒载体：指利用人类免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 的侵染和基因片段整合到宿主细胞的性质，将其开发为多质粒系统，以降低其重组的危险性，包括了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，作为慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。

慢病毒属（lentivirus）在分类上属于逆转录病毒科，包括8种能够感染人和脊椎动物的病毒，原发感染的细胞以淋巴和巨噬细胞为主，导致感染个体发病。慢病毒感染的主要临床特点是在出现典型的临床症状以前，经历较长的潜伏期，之后缓慢发病，因此被称为慢病毒。

慢病毒成分，为了提高慢病毒的安全性，将生产病毒所需的组件拆分为多个质粒，第2代系统为3个质粒（载体质粒1个，包装质粒1个，膜质粒一个），第3代系统为4个质粒（载体质粒1个，包装质粒2个，膜质粒一个）。这两个系统的组件如下：

第二代慢病毒系统：

第二代系统（三质粒系统）包含编码Gag，Pol，Rev和Tat基因的单个包装质粒。转移质粒包含病毒LTR和psi包装信号（未显示）。除非提供内部启动子，否则基因表达将由5'LTR驱动，5'LTR是弱启动子，需要Tat的存在才能激活表达。包膜蛋白Env（由于其广泛的感染力，通常使用VSV-G）被编码在第三种单独的包膜质粒上。所有第二代慢病毒转移质粒都必须与第二代包装系统一起使用，因为LTR的转基因表达是Tat依赖性的。

第二代包装系统组件及编码信息

第三代慢病毒系统：

第三代系统（四质粒系统）通过一些关键方式进一步提高了第二代的安全性。首先，将包装系统分为两个质粒：一个编码Rev，另一个编码Gag和Pol。尽管更安全，但由于添加了一种额外的质粒，该系统使用起来比较麻烦，并且导致病毒滴度降低。

其次，通过添加与转移质粒上的异源启动子融合的嵌合5'LTR，从第三代系统中消除Tat。来自该启动子的转基因的表达不再依赖于Tat反式激活。可以通过第二代或第三代包装系统包装第三代转移质粒。有关第二代和第三代包装系统之间主要区别的比较，请参见下表。

慢病毒包装：

右侧简单示意图概述了生产感染性转基因慢病毒的过程。将3-4个质粒转染到A293T细胞中：

在更换培养基和短暂的温育期后，将含有病毒的上清液移出并保存或离心以浓缩病毒。然后可以使用粗病毒或浓缩病毒转导目的细胞。

参考文献：

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