视网膜铺片细胞膜片钳（1）

一年前在自己还没有什么电生理经验的时候和一个师兄学习了铺片视网膜细胞膜片钳的准备，后来做了半年的切片，今天终于又鸭子上架做铺片了。这里分享一点心得。

1 小鼠麻醉后用镊子夹出眼球（jove里看来的），血要冲洗干净，之前师兄是用弯剪剪下来的。

2 用胰岛素针头给眼球戳洞，用有齿镊夹住角膜。镊子的头径能达到0.15mm及以下最好。

3 剪除角膜的时候沿着角膜缘剪，如果剪太少，则残留的睫状体会影响下面的分离，剪太多，则视网膜很容易和巩膜分离了。

4 角膜缘剪得好的情况下，再夹走晶状体，眼杯是有型的，不会变形。此时可以用镊子伸进去夹一下残留玻璃体。

5 用血管钳夹住的刀片头将眼杯切成两半。可以看到三根血管，沿着连线成直线的那一对血管的方向切开则刚好分成了眼球的腹背侧。

6 取一半用，剥离巩膜，此时看到大块的玻璃体也可以清除。

7 将视网膜吸到载玻片上，用滤纸吸走水分，用细毛刷和镊子将视网膜铺开。

8 用尖镊子可以轻轻剥离一层带着一些颗粒状黑色杂质的膜。左手用很软的毛刷按住。

9 用打了洞的millipor滤纸吸住视网膜。

10 放在水槽里暗适应半小时。

11 用电极针划开内界膜的口子。高倍镜下看视网膜表面没有絮状物，视网膜没有皱褶，已经成功了一半。再给了正压的电极尖端下到能到碰到内界膜，再上下左右滑动，你可以感觉尖端有东西扯住的时候，划来划去才有意义。可以往远端划选一点，那么视野中心的膜就破了一个口子。之前有人和我说是像水涌出来。我是还没有达到这种境界，没感受到过。然后目前我就是在那个洞里面记了细胞。要记别的地方，又得重新划开一个口子吧。

这样就完成了。

有几个注意点：显微镜最好是要用下光源；滤纸不同，吸住视网膜的方法也不同；镊子的尖端，最好是0.15mm及以下的；镊子尖端脏了的时候可以去夹一下普通滤纸，可以粘走脏东西。

目前就这样，我也会在往后的学习中积攒更多的心得，欢迎大家交流。