实验方法：番红O固绿染色

原 理:

番红(也称作番红O或基本红2)是个用在组织学和细胞学的生物染色剂。番红在一些染色的实验计划表中用作复染剂，将所有的细胞核染成红色。这在革兰氏染色和内孢子染色都是典型的复染剂。它也可以被用来检测软骨、黏蛋白和肥大细胞的颗粒。

嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结果呈现红色，嗜酸性的骨与酸性染料固绿结合呈现绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。

操作流程：

实验前固绿溶液放60℃水浴，预热2h.

1. 石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗3遍，每遍3min;

2.  浸入预热的固绿染色液中，浸染6min；

3. 蒸馏水急洗1min；

4. 入番红O溶液中染色4min；

5. 入蒸馏水急洗1min；

6.用冰醋酸溶液分化1min；

9. 95%、100%酒精脱水15S，二甲苯透明，中性树脂封固。

结果：

透明软骨及钙化软骨区呈红色，软骨下骨区呈绿色或蓝色。软骨下骨与钙化软骨层呈凹凸不平的梳齿状结构，透明软骨区可见淡染的软骨细胞陷窝，软骨下骨区可见散乱分别的骨细胞。

染色注意事项:

1.      标本固定尽可能用多聚甲醛固定.脱钙后一定要流水冲洗过夜后再脱水包埋.否则番红不易着色.

2.      固绿染色液长时间放置后染色能力下降，要延迟染色时间；重复使用要过滤；

3.      蒸馏水洗速度要快，不可以过洗。

4.      可以不染细胞核，如果一定要染细胞核，可以用Weigert氏铁苏木素染核。

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