实验专栏丨JC-1线粒体膜电位染色教程来了，快上车

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。JC-1染料表现出电势依赖性的积聚在线粒体内。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm，Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm，Em=529 nm）。因此颜色的变化非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。线粒体的去极化程度也可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

一. 实验材料及试剂

培养板、酒精灯、移液枪、CO2培养箱、流式细胞仪等；PBS、Incubation Buffer、JC-1等。

二、实验内容

取细胞，吸除培养液，用PBS洗涤细胞两次，取1× Incubation Buffer并预热至37℃，吸取500ul 1× Incubation Buffer，加入1ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液，取500ul JC-1工作液将细胞均匀覆盖，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15-20min，用1×Incubation Buffer洗涤细胞两次，消化离心，用1×Incubation Buffer重悬细胞，用流式细胞仪(BD，美国)检测。

三、注意事项

1、稀释JC-1时要迅速，否则易聚集，不易溶解。

2、JC-1如果一次使用量较小，需把每管再适当进行分装，尽量避免反复冻融。

3、 JC-1在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。