人T细胞高效扩增

T细胞（CD3+细胞）在机体的免疫防御中起到重要作用。其数量占到外周血单个核细胞70%左右，包含辅助T细胞（CD3+CD4+细胞）和细胞毒性T细胞(CD3+CD8+细胞)。本公司的T细胞高效扩增试剂盒适用于从单个核细胞（MNC）在体外高效扩增成T细胞。具有扩增效率高，

细胞纯度高以及无血清培养等特点。本试剂盒适用于从约6x10⁶单个核细胞（MNC）体外高效扩增成T细胞。

【操作步骤】

1.第0天，将制备好的单个核细胞（MNC）按1.8x10⁶/mL细胞密度铺于T-75细胞培养瓶中，共50mL培养基，加入2μL/mL的T-I因子，20μL/mL的T-II因子以及500U/mL的IL-2 ；

注意：

1）使用时可先将装有T-I因子与T-II因子的试剂管离心，确保足量；

2）IL-2 使用T细胞无血清培养基溶解后，可存于2-8°C冰箱，存放时间不超过两周，若长期使用，可存储于-20°C冰箱。建议将IL-2溶解后分装于无菌试剂管后保存于-20°C冰箱，使用时溶解即可，注意不要反复冻融，且不可使用长期置于2-8°C的IL-2，否则将严重影响本试剂盒的扩增效果。

2.第3天（3×24h），补加100ml T细胞培养基（含IL-2 500U/ml），转入细胞培养袋，此时每袋含150ml培养液；

注意：

1）为使更多的细胞转入到培养袋中，可先将T-75瓶中的细胞吹打均匀，全部转入培养袋中，再用部分新鲜配制的培养液润洗培养瓶，并再次转入培养袋中，最后补齐培养液即可；

2）在此次补液以及后续的补液操作中，尽可能先将T细胞无血清培养液预先37°C温浴，从而使细胞的培养温度在较小的范围内波动。

3.第5天，补加150ml T细胞培养基(含IL-2 500U/ml)，此时每袋含300ml培养液；

4.第7天，补加300ml T细胞培养基(含IL-2 500U/ml)，此时每袋含600ml培养液；

5.第9天，补加600ml T细胞培养基(含IL-2 500U/ml)，分成两袋，此时每袋含600ml培养液；

6.第11天，每个培养袋均补加400ml T细胞培养基(含IL-2 500U/ml)，每袋培养液总体积1000ml；

7.第13天，收获T细胞。

注意：由于样本之间的差异性，T细胞收获日期并不局限在第13天，而是第10天至第13天之间皆有可能，收获的依据以培养基变黄为准。另外，有些样本的T细胞长速快，也可缩短补液时间，例如将两天的补液间隔时间缩短为1天半等。