【原创总结】巨噬细胞RAW264.7的状态拯救

养RAW 264.7细胞有很长一段时间了，之前细胞状态非常好，贴壁时细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察明亮如小珍珠状大小均一。

培养条件：DMEM高唐培养液+GEMINI10%胎牛血清，双抗，换液和传代之前PBS和培养基一定要温浴到37℃左右。

传代过程不需要胰酶消化，以10厘米皿为例，RAW264.7细胞80%左右融合（密度再高容易老化生出伪足，贴壁性也会增强）。弃培养基用5 mL PBS洗去培养基残留，弃PBS，后再加入5 mL PBS，在培养箱中孵育10分钟后吹打下来。吹打过程很轻松，细胞很容易脱落，10厘米皿大概吹打4次就能将细胞全部收集起来（吹打过程避免气泡产生）。1000 rpm离心5分钟，1:3-1:6传代，1-2天后即可使用。

但是最近细胞状态很差，会生出伪足，形态变得扁平，细胞粘附性很强，难吹打传代，生长速度非常缓慢，且容易漂浮死亡。怀疑有支原体、衣原体污染，但是手边没有检测试剂盒所以未进行检测。后续用盐酸左氧氟沙星处理后状态恢复。处理方法如下：

盐酸左氧氟沙星（水溶性好，价格便宜，5g 200元），溶于PBS中，成为10 mg/mL的母液，过0.22无菌滤膜。状态不好的细胞传代后，12小时细胞贴壁，融合率20-30%，加入配好的盐酸左氧氟沙星，终浓度6 ug/mL，次日PBS清洗细胞后换液，后加入盐酸左氧氟沙星，终浓度3 ug/mL，次日PBS清洗细胞后换液，后加入盐酸左氧氟沙星，终浓度1 ug/mL。一轮下来细胞状态明显恢复。