WB目的条带出不来
发布于 2021-07-28 · 浏览 1176 · IP 江西江西
这个帖子发布于 3 年零 282 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位大佬好，我提取的蛋白是小鼠肿瘤组织，标本比较宝贵，提取后没有做BCA定量。
内参蛋白是GADPH
目的蛋白是IL-6 (24KD)、p65(65kd)、p-stat3（79、86kd）
第一次上样量全是10微升，所有的目的蛋白都有条带
P-STAT3
P65
IL-6
GDPDH
后面根据内参，image j 计算灰度值后，调整了上样量，第二次跑的内参是这样的：
GDPDH 上样量是：3微升 16.3微升 6.3微升 4.9微升
然后目的蛋白
P-STAT3
IL-6
P-65
所有的试验条件都是一样的，除了上样量有改变。10%的胶，上样前煮蛋白及震荡，电泳时80v，30min；120v，70min。转膜是0.45mm的PVDF膜，260mA,60min.TBST洗10min*3次，5%脱脂乳摇床室温封闭1小时。TBST洗10min*3次。一抗摇床4度冰箱过夜（一抗用5%BSA配置），TBST洗10min*3次。二抗5%脱脂乳稀释，室温摇床1小时。TBST洗10min*3次。曝光。
请大佬帮忙分析下为什么会没有目的条带，然后这个蛋白需要重新提取吗？组织蛋白提取时，有什么需要注意的吗，小鼠肿瘤组织特别硬，超声过还是会剩余一些组织在提取液里，有什么办法吗？谢各位大佬！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1176
4 2 2
