人皮肤成纤维细胞原代培养，增生性瘢痕成纤维细胞原代培养个人经验总结

提了快两年的原代细胞，给大家分享点经验。

先放图

4-X四倍镜下观察增生性瘢痕成纤维细胞，48小时

10-X十倍镜下观察，48小时时候的情况，增生性瘢痕成纤维细胞。

步骤：①临床标本去除表皮和皮下脂肪，切成小块，大小约1mmx1mmx1mm，其实实际操作的时候，有时候组织块直径3-5mm,那就消化时间久一些。

②用II型胶原酶消化，37℃，就是将组织块和胶原酶一起放在50ml离心管，再放在37℃水浴锅消化。具体消化时间看组织块大小，6-20小时都尝试过。组织块小的话6-8小时就可以了，如果组织块比较大，可以消化过夜。

③消化好后，用滤网过滤，网孔直径为100um,黄色或橙黄色的滤网，过滤之后，离心，1000转，3分钟。

④离心后重悬，放在培养皿培养。

⑤24小时内要用PBS洗一遍，洗掉杂质。