实验专栏丨DHEA法诱导构建PCOS大鼠模型

1、选取9只23日龄的SD雌性大鼠，连续20天皮下注射DHEA（甘油溶解）。

造模20天后取一只诱导组和一只对照组卵巢组织进行HE切片， 确定造模成功后，取2组剩余大鼠的一侧卵巢，清洗后将卵巢投入在37'C恒温含3ml卵泡分离液的培养皿中，在40倍解剖显微镜下先用眼科镊将卵巢组织分成小块，然后用直径0.1mm的镊子轻轻分离卵泡，收集分离的卵泡培养24小时后在倒置显微镜下评价机械性分离卵泡，测量卵泡直径，根据卵泡直径大小及卵泡、卵子评价标准选择实验所需不同阶段卵泡（腔前卵泡、有腔卵泡，退化卵泡）。

2、试剂说明：

是人体血液循环中最为丰富的甾体物质。目前临床用于抗衰老、糖尿病治疗、癌症治疗、肿瘤治疗。并且取得重大进展。

DHEA 是一种具有胆固醇△5，6 -双键及可酯化 3β-羟基的甾体，分子式 C 19 H 28 O 2 ，分子量 288. 43，熔点 146 ～151 ℃，白色立方柱晶体或结晶性粉末，易溶于苯、乙腈、甲醇、乙醇等有机溶剂，不溶于水，吸收波长范围 200 ～215 nm，其结构式如图 1。

仪器设备

眼科镊子，手术剪刀，持针器，止血钳，精密电子称，注射器，缝合线。

实验动物及试剂

23日龄雌性SD大鼠，脱氢表雄酮，甘油，水合氯醛。

脱氢表雄酮的配制：将60mg脱氢表雄酮加入10ml甘油，充分震荡溶解然后，配制成6mg/ml的脱氢表雄酮溶液。置于4℃冰箱保存。

实验步骤

（1）麻醉：大鼠称重后用10%水合氯醛按350mg/kg剂量腹腔注射。

（2）固定：将老鼠仰卧手术台，两后肢向后外方伸展固定，充分显示其腹部。

（3）消毒：用棉签沾取碘伏涂抹老鼠腹部，注意涂抹均匀。

（4）去势手术，显露卵巢：用手术剪刀将腹部打开，然后用蘸取生理盐水的棉签找到其子宫，然后顺势找到其卵巢。用小手术剪刀将卵巢取下（注意不要剪到卵巢）。将剪下的卵巢用PBS缓冲液冲洗掉血液和其他杂质。然后放到3ml卵泡分离液中。

（5）手术后处理：将老鼠和使用过的器械以及手术后的赃物处理及清洗。