人脐静脉内皮细胞成管试验心得体会

本人最近做了内皮细胞成管试验，试验前也是各种搜索网上的帖子，各种请教，然后才开始做的，因此少走不少弯路，今天终于结束，也拍了很多照片，和战友们分享。

一、第一次做成管试验，失败告终。主要如下：化基质胶时候，正好中午了，伙伴们一起去吃饭，请他们吃了料理，个人花费600多元，结果回来后，基质胶一瓶，全部成胶了，因此总结，化基质胶时候，一定专人守护，避免发生这么大的损失。要求提前半小时化就行了，放在4°冰箱。然后再次化一瓶基质胶，这次守着看着它融化后，放入提前准备的冰盒，碎冰包绕，枪头，孔板提前预冷。这次采用了48孔板，一共做了一板，后来发现有点多了。加了100uL基质胶，每孔细胞种了10万个。结果，并不是很理想，因为基质胶加得有点多，因此，靠近孔板壁得地方会吸附很多基质胶，因此形成了周围高，中间低得凹陷，虽然可以成管，但是可供拍照的视野很小，不平，不容易聚焦。另外特别注意的是：铺胶时候，一定要避免任何气泡得产生，至关重要，切记！

二、第二次做成管试验，是昨天，也就是周日，上午，一早就按照流程开始。预冷，化胶等等，这次吸取教训，采用了24孔板，地表面积大，可供拍照面积大，并且提前准备了1ml注射器。24孔板，在碎冰上操作，每孔注入100ul基质胶，大概做了12孔，其中6孔放了爬片。胶一定要垂直滴入孔底中央，然后想办法让他均匀涂布孔底，而且无任何气泡。我采用了震荡得办法，滴完胶后，单手拿板进行震荡，使胶均匀分布，仔细观察，其实周围仍有吸附得多余基质胶，因此我用了提前准备的1ml注射器，沿着周围把多余的胶吸掉了，整个过程保证无气泡产生。然后孵育放置30-60分钟。然后加入200ul培养基，细胞每孔接种6万个-10万个，然后加干预药物。孵育箱进行孵育4小时后观察，发现爬片下面，和孔板接触的地方，布满了均匀的气泡，不知道什么原因。因此，采用了非常尖得镊子，夹起爬片，然后酒精棉球把爬片底部擦拭干净，换一个孔放入，加培养基进行继续观察，实践证明，爬片效果很好。上传的图片并非最美的，只是选了比较普通的进行上传，因此希望战友们自己拍出最美的图片。

然后下午观察，晚上观察，拍照到凌晨4点钟，回去睡了几个小时，早上8点，中午12

点继续观察拍照，拍到美丽的图片，兴奋啊，一点都不累，反正拍个够够够得，刚刚结束了全部得拍照，爬片取出来，准备固定后拍共聚焦。

再次，总结，记录自己的一点心得体会，与战友们共勉。