做细胞冻存的人都经历过这些致命败笔！你逃过了吗？

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在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。故介绍一些致命的 “败笔”，和解决方法。 希望对大家有帮助。

（ 以 Raji 为例）

一、细胞冻存：

1. 错误的时机：

细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。

解决：

最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。

2. 细胞太少：

冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。

解决：

离心后调整细胞浓度。（不要重新洗细胞）。

3. 盖子不紧：

冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。

解决：

选择原配的管子和盖子（不同牌子 / 型号的颜色会有差别）。

4. 单薄的冻存盒：

放在－80 度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。

解决：

选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。（冻存的原则：缓降！）

5. -80 度太久：

放在－80 度冰箱的时间超过半年。（冰箱的温度难以恒定：开门 / 关门，电压不稳等）

解决：

尽快转入液氮。

6. 液氮不足：

液面不能漫过所有细胞。

解决：

定期测量液氮储备，保证细胞全部浸在液面下。

7. 取错细胞：

找不到 / 拿错冻存管。

解决：

每支冻存管都标上细胞的名称，冻存时间，并记录在册。

更多详见： https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/31126938

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