小鼠膝关节软骨切片制作
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实验步骤如下：
一、取膝关节软骨：小鼠脊椎脱臼处死放于冰盒上，剪开腿部皮毛，取下连着肌肉的腿于冷的PBS溶液中，仔细去除肌肉组织，剪下膝关节软骨组织。
二、固定及脱水：将取出膝关节软骨置于4％多聚甲醛常温固定48小时，然后30％蔗糖溶液4度脱水48小时。
三、切片：将切片机温度调为-20℃，待温度降到-20℃，将软骨组织取出吸干蔗糖溶液，放于切片机30分钟冷冻，而后用OTC包埋于载物板上20分钟左右，切片20微米，贴片于载玻片上，常温晾干后直接进行后续步骤或者放于-20℃储存。
四、打孔及封闭：将切片取出放于湿盒中于常温放置10分钟后，PBS清洗三次，每次5分钟，吸干液体，加入0.5％TritonX-100洗15分钟，再PBS洗5分钟×3，加10％山羊血清室温封闭2小时。
四、染色：不洗直接加入两种目标一抗（比例参照对应抗体说明）,4℃孵育过夜，再用PBS洗5分钟×3，加入二抗（1：400，我们实验室一般都用这个比例），室温避光2小时，PBS清洗5分钟×3，再用DAPI染，而后PBS洗5分钟×3，加防荧光淬灭剂封片。
五、荧光显微镜观察
六、实验结果如下：（第一张目的蛋白一，第二张是目的蛋白二，第三张是DAPI，第四张是merge）
七、实验小结：1、切片贴片时必须平整，保证片子的平整实验基本上成功七分了，片子不平整导致片子不在同一水平，一部分清楚，一部分模糊；2、背景过深，通过降低一抗溶度或增加一抗及二抗的清洗时间，反之相反。
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