求高手解答cck8实验的疑问

目的：利用cck8实验筛选最佳药物浓度（药物：ERK抑制剂），分别设置三个96孔板，在24,48,72三个时间点测定吸光值，培养条件：85%高氧。

操作：加药前预培养了24小时，细胞贴壁了（条件：正常培养条件）。

cck试剂是10%用培养基配置，加cck试剂前先吸出旧培养基弃去（全部吸净）。

空白对照：在空孔中加cck试剂（与上面一起配制）

结果：24还好，随着药物浓度增加，吸光值递减，并且所有实验孔吸光值大于空白孔的。48小时，趋势与24小时相似，但是所有实验孔中（共60个）出现3～5个吸光值小时空白孔的。72小时，60个孔中一半以上吸光值小于空白孔，所以趋势乱了。

自我分析：由于每孔只加2000个细胞,怀疑是否加细胞前没有充分混匀导致有些孔加的细胞太少甚至没有（24，48，72各一个96孔板，先从24开始加的，所以怀疑到了72小时细胞沉下去了，72小时吸不到。）。但是经显微镜观察，所有吸光值小于空白的孔都有细胞（可能死了，但是可以看出确实种上细胞了并且还不少），同时观察到空白孔均没有细胞污染。只加培养基的吸光值只有加了cck的一半并且都小于实验孔。如果说cck试剂背景高，那么实验孔和空白孔也会一样。带有药物的培养基全部洗净，肉眼看不出残留。

那么为什么实验孔吸光值会小于空白孔？求解答！