WB的200kd大分子目的蛋白没有条带

指标是磷酸化,使用的marker是10-170的marker。CST抗体,官网为200kd,一抗1:2000,10%+5%的胶,电泳70V-110V,恒压116V湿转100min,5%脱脂牛奶封闭1h,一抗4°过夜,二抗兔抗1:3000。第一次细胞上没有条带,组织上如下:

后面再做的时候,一抗1:1000,8%+5%的胶,电泳80V-120V,恒压116V湿转120min,二抗1:1000,条带如下:两次上样蛋白质量均相同(25ug),球球好心人帮我看看啥原因,我这是拖尾了么?有什么改进方法么,是否是配胶过程有问题,或者是配胶的试剂有问题?

最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3603