肿瘤细胞培养求各位战友指导!!
本人从去年12月开始培养乳腺癌mcf7(贴壁细胞),细胞为新购买的,来源明确,无污染。用的gibco 1640+胎牛血清10%。1月细胞没有任何问题,冻存了30多管,且一直都在传代,用的是10cm培养皿,0.25%胰酶2ml消化2分钟,长至80—90%时传代,1传3,隔一天一传(例:1月1日传代,1月3日再次传代)
从今年1月开始,出现细胞异常,主要表现为背景不干净,有黑色小点,但细胞没有问题,也不悬浮,到传到3代时,第一天和第二天细胞没有问题,但第三天就悬浮。
已清理过孵箱,操作台,更换过新的培养基,血清,胰酶等。细胞也复苏的是最前面几代细胞。但是还是传到第三代就出现问题,后面细胞悬浮。做过支原体pcr检测,是阴性,也加了支原体抑制剂,也加入了黑胶虫抑制剂,还是没有改善。已经困扰我3个多月了,人都要崩溃了……求各位指导一下,或者判断一下是什么问题。下面附上第三代,第二天的细胞图



