总结一份超速离心法提取外泌体 protocol

准备物品：密理博10kd浓缩管，22μm，45μm注射式滤头，落地式离心机配套30ml或50ml离心瓶

1、取患者体液或细胞上清10-15ml，加入15ml无酶离心管中，3000rpm室温离心10min；

2、将上清倒入50ml离心瓶中，放入落地式离心机，4℃ 16000g 离心 30min；

3、20ml注射器吸取离心瓶中上清，依次过45μm，22μm滤头，将液体转移至浓缩管中；

4、浓缩管3000g 4℃离心30min左右，可适当延长时间，直到浓缩为1ml左右液体；

5、将浓缩后的液体转至1.5ml超离管中，配平后 110000g 4℃离心70min；

6、弃上清，用200μl PBS重悬沉淀，用枪头反复吹打超离管底部，注意避免起太多泡沫，外泌体存在于重悬液中；

7、转移PBS至新的EP管中，加入1ml trizol 或细胞裂解液、蛋白loading、DTT提取核酸或者蛋白，超离管洗净备用。