如何避免RNA酶污染？

体液

体液（如汗液和皮肤油）中含有丰富的RNase活性。因此，双手不戴手套会非常容易造成RNase污染，从而对关键实验造成影响。在实验过程中佩戴手套，并经常丢弃用过的手套，再换上一副新的手套。（提示：与裸露皮肤接触过的，摸过冰箱把手、门把手、移液器、钢笔实验室电话的手套均可视为被RNase污染）

一直穿着实验服，以避免衣物上的某些颗粒物质掉入样品。请避免在气流扰动的环境或可能形成微粒的附近（如黑板）操作RNA。

枪头与离心管

高质量的耗材一般可视为不含RNase。不过，枪头和离心管容易成为被忽视的RNase污染源。请确保从未开包的枪头盒中取用枪头，离心管也需来自未开包的。仅进行高压灭菌操作无法破坏全部RNase活性，因为这些酶类耐受性强，而且降至室温后又会重新恢复部分活性。务必使用经过无RNase检测并具有相关认证的枪头和离心管。

需要使用玻璃器皿和金属器皿时，可对其进行烘烤处理。烘烤操作通常需要在450°F（232°C）下进行2小时或更长时间。在烘烤之前，确保将金属器皿物体，以及烧杯和烧瓶的顶部用铝箔包好，以避免在烘烤之后再度发生污染。

水与缓冲液

由于RNase无处不在，供水设备的来源及日常维护常导致分子生物学应用中的水和缓冲液成为RNase污染的常见来源。焦碳酸二乙酯（DEPC）处理是灭活水和缓冲液中RNase最常用的方法。不过，包括Tris在内的某些试剂不能使用DEPC进行处理。

DEPC处理是消除水体、缓冲液及其他溶液中RNase污染最为常用的方法。（注意：某些缓冲液不能使用DEPC）DEPC能够通过修饰RNase及其他蛋白中的-NH、-SH和-OH基团来破坏酶的活性。处理步骤通常包括将溶液与0.1%的DEPC在室温下共同孵育数小时——通常过夜——之后对溶液进行高压处理以去除残余的DEPC。部分研究人员注意到在对DEPC处理的溶液进行高压灭菌之后，会嗅到一种果味的芳香气味，便担心这可能是未灭活的DEPC。其实这是由于高压灭菌灭活DEPC过程中，产生了少量的乙醇。乙醇可能会与痕量的羧酸相结合，生成挥发性酯类从而散发出此种特殊气味。这并不是DEPC未经完全消除的信号，不会对后续反应造成干扰。

含有伯胺基（如Tris）及一些含有仲胺或叔胺（如HEPES）的试剂不能使用DEPC进行处理。胺基会与DEPC反应并将其吸收，这样就无法实现对RNase的灭活处理了。同时，对试剂中胺基的修饰也会影响其缓冲能力。对于只能进行过滤除菌，而不能耐受高压灭菌的溶液，如MOPS，也就不适合用DEPC来处理，因为高压灭菌是灭活DEPC必不可少的步骤。

操作RNA时的注意事项

在实验过程中戴着手套可避免源自人手的RNase污染

触摸皮肤（例如您的面部）、门把手及普通物体表面后更换手套

使用RNA操作专用的移液枪

使用经检测，确保为RNase-free的枪头和离心管

使用RNase-free的化合物与试剂

将实验室内一片远离/遮蔽通风孔或开放窗口，走动较少的区域指定为RNase-free区域。

在酶促反应中抑制RNase

在体外转录、反转录和翻译等酶促反应中对抗RNase的传统方法是使用人类胎盘核糖核酸酶抑制剂（也称为RNase抑制剂蛋白，RI或hPRI）。这一蛋白仅针对核酸酶当中的RNAase A家族具有抑制性，该家族的成员包括RNase A、B和C。该抑制的模式为非竞争性的，即该蛋白并不会破坏这些RNase，而只是与其按1:1的比例结合。因此使用该抑制剂一个潜在的问题是其自身也可能被RNase污染。长时间与存在污染的抑制剂共同孵育，有可能会向酶促反应系统中缓慢释放核酸酶。因此，尽管这种抑制剂有助于解决多种核酸酶污染的情况，它并不一定是现有的最佳抑制剂。