血管渗漏试验

（1）贴壁细胞培养时密度不应超过90%的密度。内皮细胞密度推荐每孔2*10^5。

（2）试剂盒使用前提前将100ul的全培加入上室，对Ⅰ型胶原膜进行水化，放置于37℃二氧化碳培养箱孵育2h。

（3）细胞消化后用200*g离心细胞3min，将细胞重悬至2*10^6个/ml。

（4）每孔加入100ul的细胞悬液，加入500ul全培到下室。37℃二氧化碳培养箱孵育直至形成单层细胞。

（5）成单层细胞后，上下室吸去全培，分别加入刺激的培养液，上室加入100ul，下室加入500ul。加入过程迅速，勿使细胞变干。37℃二氧化碳培养箱孵育至所需时间。

（6）在空白孔中加入300ul基础培基，然后吸取掉上室和下室的液体。

（7）每个上室加入100ul的FITC-葡聚糖，上室移至空白孔中，37℃二氧化碳培养箱孵育5min。

（8）移去上室，将下室液体混匀后加入至不透光的96孔板中，在485nm激发发光，520发射波长下读取读数。

注意事项：为评价血管通透性，需要设立背景对照(无FITC-葡聚糖)、100%通透性对照(无细胞)、无处理对照。每个对照和实验条件都应该在四孔或更多孔的重复中进行评估，以获得最佳的统计显著性。