【经验】干货——C2C12培养心得分享

最近文章都是在投，时间都花在了摸索实验上。废话不多说，直接进入主题——C2C12

首先说明大概情况，我是从20年12月中下旬开始摸索C2C12的特性，期间也跟着论坛的经验做了不少预实验，但是分化一直不是太理想，最近才成功了一批，和大家分享。

增殖培养基：高糖DMEM+10％FBS+1％PS

分化培养基：高糖DMEM+2％马血清+1％PS

遇到的最大问题就是分化不出来肌管

我从三方面进行了纠正1.细胞的密度 2.分化液浓度 3.细胞的状态

密度最开始看论坛，众说纷纭，于是我把手头的C2C12种植到了30 50 70 90的浓度用分化培养基培养，培养4天之后肌管没出来，倒是凋亡的细胞一片一片的。（后面看文献知，这是细胞状态不太好，分化过久，导致大规模凋亡）

分化液浓度，也是没有统一的说法，于是试了试1％ 2％ 5％ 10％马血清 10％FBS，分化四天也没啥肌管，有点小绝望。

查阅文献后，知道了细胞状态是关键，于是重新复苏最早的一篇C2C12，再做了浓度梯度，发现30％ 50％密度都做不出来，百分之80的细胞密度在分化两天时在光镜下看见了折射率和其他细胞不太一致的管状tube，4天时已经分化出相当可观的肌管。

细胞状态我赞同论坛帖子的说法，代数不宜太高，不能把细胞长得很满了才传代，百分之50-70就开始传代，保持分化能力。

分享是美德，希望对大家有所帮助，少走弯路！

下图是分化两天后做了个荧光共染，绿色是MYHC 红色是MYOD1

MYOD最开始是表达在核内，随着成肌分化会跑到细胞质里去