科学家发现干燥综合征诊疗新方法丨临床科研

关键词：干燥综合征，小涎腺，自噬，病理

临床医生在治病救人以及处理医患关系忙的焦头烂额之时，少有闲暇时间进行科研，很大程度上是对临床样本的浪费，也是医疗行业的损失。

很多时候，临床科研很简单，并不需要大量时间大量精力去进行大量实验，利用好临床样本，可以多、快、好、省的做好临床科研，轻松发表学术论文。

现以发表在Arthritis Research & Therapy上的一篇文章为例，简述其科研思路。

一、实验背景

在干燥综合征(SS)患者中，小涎腺(MSG)的组织浸润与疾病的严重程度和进展有关。淋巴细胞自噬的异常调节与自身免疫有关，作者在之前的工作中，首次提供了SS-MSG CD4⁺T细胞自噬上调的证据。

二、研究目的

本研究的目的是进一步探讨SS浸润和循环中淋巴细胞的自噬现象，并探讨其在疾病组织病理学进展中的作用。

三、研究思路

四、研究方法

1.HE法观察淋巴细胞聚集（病灶）和GC样结构中心，免疫组化的方法证实。

2.显微解剖后RT-PCR检测自噬相关基因ATG5、MAP1LC3A的表达。

3.流式细胞术检测外周血液自噬情况。

五、实验结果

1.通过HE染色和免疫组化的方法观察并验证了几种淋巴细胞聚集（病灶中心）：（1）小病灶；（2）大病灶；（3）GC样结构。

2.RT-PCR检测到SS-MSG中自噬基因ATG5、MAP1LC3A表达上调，统计学分析，差异显著，具有统计学意义。

3. SS-MSG的CD21+大病灶(GC样结构)中ATG5和MAP1LC3A的表达高于扁桃体的GC样结构(p=0.0001，p=0.0037)。

4.通过对自噬蛋白LC3B检测，发现自噬蛋白LC3B只在MSG T和B淋巴细胞中检测到，而在扁桃体中的T和B淋巴细胞中检测不到。

5. 免疫表型研究显示SS患者循环PBMC中自噬标志物的表达没有增加。

图一 MSG自噬标志物的组织学分析及表达。通过对MSG T（CD3⁺，棕色）细胞和B（CD20⁺，粉红色）细胞，展示了两种病灶中心：（a）“小病灶”；（b）“大病灶”；（c）IHC染色MSG T（CD3⁺，棕色）和B（CD20⁺，粉红色）淋巴细胞；（d）IHC染色MSG卵泡树突状细胞（CD21，棕色）展示了“大病灶”（CD21⁺）；（e）IHC染色扁桃体T (CD3⁺，棕色)和B (CD20⁺，粉红色)细胞展示“扁桃体GC样结构”；（f）显微解剖前，甲酚紫染色MSG的GC样结构；（g）绿线为显微解剖位置；（h）显微解剖后；（i、l）3种不同类型的SS-MSG病灶中心ATG5、MAP1LC3A基因表达水平；（m、n）在SS-MSG (GC样结构)和扁桃体GC大病灶（CD21⁺）中Atg5、MAPLC3A基因表达水平。数据均用GraphPad处理，LABManagement中研究生培养体系有相关作图软件使用教程。

图二SS小涎腺和人扁桃体的免疫荧光检测LC3B阳性淋巴细胞

六、结论

1. 自噬是SS患者MSG中T、B细胞的特征。

2. 由于自噬对淋巴细胞的生存、分化和激活以及它们分泌炎症蛋白是必须的，因此在患有自身免疫性疾病（如SS）的患者中发现这一机制也就不足为奇了。

3. 数据不仅表明淋巴细胞的自噬与SS的组织学严重程度有关，而且还强调了SS-MSG GC样结构中这一途径的异常调节（详见文献补充数据部分）。

七、经验与收获

1.确定好研究方向很重要，如：标志物、天然药物、早期诊断等。

2.课题要有创新性和实际意义，比如重大疾病发病机制、传染病传染途径等。

3.利用好临床样本，临床样本取自人体，研究价值与意义远非细胞系和动物模型可比，可以使文章质量大幅提升。

4.记录好病例报告，利用良好的报告进行数据处理省时省力。

5.要灵活运用免疫学、分子生物学等交叉学科实验技术，开拓思路和视野。

6.在重视临床样本进行科研的同时，也要注意临床样本的保存，以备后用，避免资源的浪费，西安格物医疗科技有限公司致力于生物医学样本库的构建，可帮您更快更好更便捷的保存样品。

参考文献

S Colafrancesco, M Vomero, V Iannizzotto, A Minniti, C Barbati, et al. Autophagy occurs in lymphocytes infiltrating Sjögren's syndrome minor salivary glands and correlates with histological severity of salivary gland lesions. Arthritis Res Ther. 2020; 22(1):238.