总结一下最近的实验，慢病毒浓缩专题（原创）

虽然标记了原创，其实是一个比较容易重复的方法，性价比高一点，希望有助于大家的实验啦~

实验目的：慢病毒浓缩

实验材料：新鲜热乎乎的慢病毒培养上清；新鲜刚配置的PEG 6000。

由于预约超离比较麻烦，使用过滤柱，抠门老板又嫌弃太贵了，小蚂蚁查阅文献后决定使用PEG 6000进行浓缩，通过不断摸索，最后结局还是美好的

准备工作：

（1）取出慢病毒培养上清（一定是过滤后的哟），如果是刚制备的就直接用，如果是-80℃保存的，可以37℃快速溶解，不要室温溶解呦，会降低滴度。

（2）50% PEG 6000配制：

50 g PEG 6000溶解到 ddH₂O中，定容体积到100ml。高压灭菌，彻底混合4℃保存6个月。室温下 PEG 6000溶解很缓慢，可以加热溶解。

（3）4M NaCl，1*PBS

50mM Tris-HCL(pH=7.2~7.4) 如果市场上有，请直接买，如果自己配，请一定注意pH是否准确。

开始试验：

（1）在50ml离心管中配制如下混合体系。如果实验体积过大，可以使用大型离心瓶。

滤液体积： 40ml

50% PEG 6000： 10ml（PEG 6000静置后会分层，肉眼不容易观察，加样时，请混匀后使用）

4M NaCl: 4.2ml

PBS: 4.6ml

（2）将混合液放置于4 ℃冰箱中，1.5h。每20min，进行上下颠倒，此处可以看到混合液中PEG透明丝状，混合后分辨不出PEG为止。这里影响分离效率，不要省略呦~

（3） 使用固定角转子的离心机，在4 ℃下, 7000g离心10min。固定角转子的离心机，升速9，降速5，可以提高分离度。

（4） 离心后，应该可以看到明显的白色沉淀，小心倒出上清液，尽量弃除干净。

（5）每瓶加入适量的 50 mM Tris-HCl（pH 7.4），重悬沉淀。注意，如果溶解缓冲溶液pH不准，将直接导致实验失败~

（6）涡旋30s, 分装保存于-80℃里。

此时，我们将得到梦寐以求的毒液，对的，它是浑浊的。

附图为证，其实感染细胞的能力也还好呦~，最后，祝大家实验顺利~