pKD46质粒的电转问题

最近在做 BL21（DE3）的 red 同源重组敲除，电转 pKD46 质粒一直不成功，也尝试过化转的方法，也不行。质粒的浓度约30/40 ng/ul，一般加4ul 至 100ul 自制的感受态细胞。

电转感受态细胞的制备：菌液OD600 = 0.4 ，水洗两次，10% 甘油两次，重悬

想请教一下大家是是不是质粒的浓度太低了呢，或者还有没有其他的原因，已经做了很久了，就是转不进去，谢谢！