【求助】小鼠肠道巨噬细胞提取问题

因为实验需要，最近在提肠道巨噬细胞，网上没有成熟的protocol，只能根据文献里面method的方法做，但是提取污染概率高，细胞活性差，至今还没有成功提出能贴壁的巨噬细胞。

我消化使用的是胰酶和胶原酶Ⅳ，充分消化后梯度离心，取中间云雾层的巨噬细胞。

请问有没有朋友成功提取过肠道巨噬细胞呀？求交流，求指导QAQ

protocol大致如下，是文献里抠出来的。

取出小肠在PBS中冲洗，移除小肠中的粪便、脂肪组织和Peyer‘s补片。纵向切开肠管，切成0.5 cm的切片，用PBS冲洗4次。洗涤后加入12.5mL含5 mM EDTA和2 mM DTT的新鲜无钙无镁PBS，37℃搅拌20min分离上皮细胞。通过猛烈的摇晃去除上皮薄片，剩余的组织用PBS洗两次，切成小块，然后按照脑小胶质细胞的说明消化和提取。

将小胶质细胞切成小块，分别用0.2 mg/mL IV型胶原酶(C5138，Sigma)和0.05 mg/mL DNase I(Roche)在含10%FCS的RPM1640培养基中37℃消化60min。消化后的混悬液用内径1.2 mm的注射器匀浆。脑细胞悬液采用40%/80%层状Percoll(GE Healthcare)梯度离心法分离，1578×g，室温，低加速度，无刹车，20min。收集中间界面层。对新生小鼠，用消化后的脑悬液染色，不经Percoll分离。