骨组织总蛋白提取

骨组织总蛋白提取 S A -0 2 -BT

描述：

骨组织通常用于研究的有两种类型：密质骨和松质骨。骨组织中的细胞紧密堆积，由于其独特的结构，很难有效地从中提取总蛋白质。使用传统的溶液法提取蛋白质如RIPA效率低，产率也很低，提取的蛋白质图谱也是不完整的。本方法利用离心管技术以及优化的裂解液，利用物理研磨和化学裂解相结合，提供了一种简单和快速的从人或动物骨组织中提取蛋白质的高效方法。可根据特定的下游应用选择变性裂解液或天然裂解液。整个过程不到10分钟即可完成，蛋白质得率根据骨骼样品类型不同在0.5-2mg/ml范围

所需附加材料

台式离心机

最高转速可以达到 14000 16000xg

重要产品信息

1. 变性缓冲液含有离子型表面活性剂和其他化学物质，在低温下容易析出，建议不要在冰上预冷。天然缓冲液可以预冷，不会析出。裂解缓冲液中不含蛋白酶抑制剂，如果蛋白易水解，建议在使用前将蛋白酶抑制剂cocktail添加到缓冲液中。为了测定蛋白质浓度，推荐使用BCA（Pierce）试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂（罗氏的磷酸酶抑制剂）应在使用前加入裂解缓冲液。

2. 裂解液的选择要根据下游实验来决定，变性裂解液适合用于SDS-PAGE，WB实验，天然裂解液适合用于ELISA，IP，CO-IP等实验。

3. 使用变性裂解液提取的蛋白，做WB上样前，仍需和loading buffer混匀煮制样品。

操作方法：

为实验操作方便建议大家按照采用推荐的样品量和裂解液。本操作可以按照比例放大或者缩小。

骨 组织 蛋白

提取前， 骨组织需要 通过机械手段（骨破碎机，搅拌机，或剪刀等） 粉碎成小块或粉末。试着尽可能多地解

剖和去除附着在骨组织上的脂肪和肌肉。 室温操作即可。

1

称取 5 0 10 0mg （冷冻或新鲜 粉碎的骨 组织， 放置到 离心管柱中。

2.

加入 50 80mg 蛋白研磨粉覆盖组织样品，加入 100ul 裂解液。

3.

立刻用塑料研磨棒按住组织扭转研磨 2 3min ，将剩余的 100ul 裂解液加入，继续研磨 30s 1min 。注意：塑

料研磨棒可以重复使用， 用 70 的酒精 彻底冲洗干净，用纸巾擦干 。

4.

盖上盖子，台式离心机最高转速离心 1min ，弃掉离心管柱 。 收集管中的上清就是提取的总蛋白，将其转移

到一 个新管中 。管底的白色沉淀是穿过柱子的蛋白研磨粉，弃掉即可。

应用提示：如果最终的蛋白质产量低，在步骤 3 中，在室温下将研磨的组织孵育 5 10 分钟。在孵育期

间，裂解缓冲液可能滴入收集管。这是正常的，不影响提取的蛋白质的质量。