HepG2细胞培养要点

最近在养HepG2细胞，因为刚接触这株细胞，对这株细胞并不是特别了解，所以走了一些弯路，也浪费了一些时间，当然，现在养的这株细胞，状态已经很不错了。现在把经验总结一下，供大家参考，避免走弯路，浪费时间。

该株细胞，官方推荐的培养条件为：MEM+10%FBS+1%NEAA，使用0.05%的胰酶消化，

  目前的培养条件：DMEM高糖含丙酮酸盐培养基，使用0.05%胰酶消化。

消化传代：

1、先将冰箱里边拿出来的培养基预热10min左右，

2、培养瓶的培养基倒出来后，用PBS润洗3次，PBS注意不含钙盐镁盐，以免影响胰酶活性。

3、加入胰酶润洗，T25培养瓶加3mL，T75培养瓶加4-5mL，润洗后倒掉，

4、再次加入胰酶消化，T25加1mL，T75加2mL，开始计时，消化约30S后，倒掉胰酶，

5、放入培养箱温热2.5min，拿出来后，勿拍打摇晃，从计时到5分钟，轻轻拍打，细胞便可脱落，当然也可以在显微镜下观察，细胞变圆变亮后终止消化，不过我个人认为，这个细胞是成团生长，较难观察。

6、细胞脱落后，立即加入含血清的培养基终止消化，吹打细胞，使细胞成为单个，吹打次数大约有15次，注意此过程不要有气泡，其实一般不将培养基吸完或打完，一般不会有气泡

7、传代比例，我个人目前是1:2传代，个人建议不要超过1:3，因为这个细胞太容易聚团

8、关于培养基的使用量，目前T25我加6-8mL，T75加20mL，这个也是官方的推荐量，个人感觉这个细胞太费培养基，培养基要勤换，大约2天要换，不然培养基颜色要变黄，培养基用量确实有点大，后期我也在在慢慢减少培养基的用量。

9、传代时间，细胞长至约80%就可以传代，另外需要注意，有过多的黄色亮斑，要传代，防止细胞有过多的老化。

最后上传几张该细胞的图片，供大家参考。因为我发现有些实验室的这个细胞，好像已经不太像HepG2了。第一张是状态比较好的HepG2，第二张是出现崩解的HepG2，可以明显看到，有大量的黑点.

以上是个人养HepG2细胞的一些经验总结，如果有不对的地方，敬请批评指正。