【原创】谈一谈我做WB的总体感受

近段时间实在是太忙，所以更新专题的事情只好一拖再拖，一不小心就到了现在。今天主要想说一说WB，也就是Western Blot,翻译成中文是蛋白印迹法。其实，在正式做WB以前，我已经看了一系列的相关材料，诸如实验原理，实验操作步骤（来自于那种非常经典的教材），还有一些防止踩坑的总结文章，还有一些呕心沥血的反思文章……凡此种种吧。但是看过了这么多的文章以后，我变得更加懵懵懂懂了。一开始，觉得这个实验还行，看着操作，我应该可以做下来，而看了这么多的文章以后，我突然意识到，完了，完全不知道怎么下手了。这处处是坑，何处是个头啊！动不动就有人一年半载没有做出来结果。这是不是说这个实验很难呢？我问了一位老师。那位老师告诉我说，不会啊，这是一个非常基本的实验，在分子生物学领域来说，这甚至可以说是最简单的实验了。这下我放心了。我想起来一段经历，就是当年考临床执业医师资格考试的时候，我也一度有点担心不能通过考试，于是就去问了一个人那个考试到底难不难？那人就告诉我说，他曾经见过一位在医院工作的研究生，考了十几年没有考过。在医院工作，考了十几年，还没有过，这考试是有多难？把一个研究生都给难倒了，何况我还只是一个小本科生，我有点惶恐不安了。但后来，我又问了另外一个人，那人说法却完全不同，他告诉我说，这个考试很简单的，以你的基础，你都不需要复习，直接去考都能过！当时听完这话，我差点就飘起来了。但事实究竟是怎样呢？只有亲自考过了之后，才会有更加真切的认识。的确，那个考试既不像前者所说的那么难，也不是后者所谓的那么简单。其实现在做WB也是一样。我做过了几次以后，就有了一些体会。不是所有的蛋白都那么难做，也不是所有的蛋白都那么容易做，所谓的简单或者难一定是有所指的。所以，在我们看到形形色色的经验文章时，最起码应该有这样一种共识。

另外，我们可能很容易看到，同样一个操作，在不同的经验文章中常常会出现不同的做法。就以激活PVDF膜为例来说一说。有教材上写到在甲醇里泡2分钟，教材毕竟是权威。有人说放在甲醇里面过一下就行了，我姑且信了，别人做WB很多，可谓经验丰富。有人说，泡5分钟，这也很有可能，质量问题嘛。有人说15分钟，为了更加保险？更有一篇堪称呕心沥血的总结里面说要20分钟，看起来时间越长越好，没有上限？所以，是真没有可以遵循的准则吗？我感到抓狂。后来，我跟着一位老师学习WB技术，我说出了我的疑惑，我问那应该怎么办？那位老师就告诉我说，其实15秒钟就可以了。老师把PVDF膜放进了甲醇中，然后开始计数15秒，后来的实验一切顺利，也就是说15秒钟足以活化PVDF膜了，不需要5分钟，15分钟，更加不需要20分钟。这就说明一个重要的问题，实践出真知。也就是说，我们遇到那种说法不一致的情况时，需要明确一件事情，要么找一位经验丰富的老师请教一下方法，要么自己亲自尝试一种方法，其实说到底准则只有一个，能够做出想要的实验结果才是王道。这是我的小导师跟我说的原话，你把理论研究得再透彻，你把书本读得再精细，但是实验做得一塌糊涂，那也肯定不行。有时，简单地动一动手（千万别偷懒，也千万别期望自己做什么都能够一次成功，做科研，本身就带有尝试的性质，这种性质不允许我们永远只有成功，而不经历失败），可能比你花一整个下午坐在那里闭目沉思管用得多，至少在做实验这个层面来说，我觉得这话是适用的。

上面这些话主要讲的一些理念，并没有讲太多实验怎么去做的细节，但是在我看来，这些理念同样重要，在我们开始做WB实验之初，如果能够意识到这些问题的存在，能够早一点规避这些问题，或许便可以更快地找到适合自己的方法，更快地做好WB实验。