记录一下自己做EdU细胞增殖的protocol

所用试剂盒为碧云天EdU-594试剂盒

自己另外准备的试剂：

①3%的BSA溶液（用作洗涤液）；称取1.5g BSA粉末于50ml PBS溶液中溶解，过滤除菌，于4℃保存。

②0.3% TritonX-100溶液（用作通透液）；第一步先配置30% TritonX-100溶液10ml，7.28ml 1*PBS溶液、0.282ml TritonX-100、2.438ml 双蒸水；第二步取1ml 30% TritonX-100，再加入99ml双蒸水，成为0.3% TritonX-100溶液。

试剂盒中试剂的准备;

①配置2*EdU溶液，使其浓度为20μM，50μl EdU+2.5ml 培养液，即以1：500比例稀释；

②1.3ml去离子水溶解一管Click Additive

③1*Hoechst配置，10ml PBS+10μl Hoechst 33342（1000*），即以1：1000比例稀释

细胞爬片铺在12孔板中，加入细胞，待细胞生长至一定数量并状态良好，加入药物或其他处理，然后进行EdU处理。

1、去除培养液，每孔加入0.5ml 4%多聚甲醛固定，室温15min；

2、去除多聚甲醛，每孔加入0.5ml 3% BSA洗涤3次，每次3-5min；

3、去除BSA，每孔加入0.5ml 0.3% TritonX-100，室温10min；

4、去除0.3% TritonX-100，每孔用0.5ml 3% BSA洗涤3次，每次3-5min；

5、在第4步洗涤时，配置Click反应液，12孔板中每孔加200μl反应液，根据孔的数量来配置，每孔反应液的配比：Click Reaction Buffer 172μl、CuSO4 8μl、Azide594 0.4μl、Click Additive Solution 20μ（反应液现配现用，在15min内必须得使用）；

6、每孔加入200μl，室温避光孵育30min；

7、去除Click反应液，3% BSA洗涤3次，每次3-5min；

8、每孔加入0.5 ml Hoechst，室温避光孵育10min；

9、去除Hoechst，3% BSA洗涤3次，每次3-5min；

10、装片，拍照（用的蔡司荧光显微镜，20倍镜，图片用Zen软件处理）。