提取细胞蛋白步骤

细胞提取蛋白实验步骤

1. 实验准备：

冰盒 （冰上放遇冷PBS液体和细胞）裂解液RIPA和PMSF（-20℃保存）细胞刷（需要用清水冲洗后，擦拭干净） EP管

2. 液体配置：

如果是六孔板，每个孔加大概150uL(PMSF和PIPA比例是1：100

3. 实验步骤：

将细胞培养液吸取干净

PBS洗三遍，不要混用*头

加入裂解液，裂解1-2min

裂解期间，将5X loading buffer 从冰箱取出 用总的液体体积/4就是需要加入的体积

用细胞刷把贴壁的细胞刷下来，尽量全程在冰上操作

吸入到EP管中，振荡，冰上裂解10min

将裂解好的细胞放入管中，离心 14000rpm 20min ,吸取上清。

然后加入loading buffer 进行蛋白变性，100℃煮10min，如果不用需要放入-80℃进行保存。