关于线粒体JC-1染色,求教各位大佬
本人养的MPC5足细胞,高糖高脂诱导损伤,目前用赛默飞买的JC-1染色想看看线粒体膜电位的情况,另外同时加入Hoechst 33342染细胞核,配置JC-1工作液挺顺,溶解度很好,染色后红绿(线粒体)、蓝(细胞核)都能看到。
目前问题是:
1.模型组的细胞红色荧光都非常亮,甚至亮的发橙黄色,但是普通镜下看,模型组细胞确实死了很多,证明确有损伤,这亮的发黄的线粒体是JC-1浓度过高的表现??我的染色时间是30min,拍摄曝光时间是200~500ms,染心肌细胞,就是红色,但是染足细胞就偏黄色或者橙黄色,很亮,这是什么原因呢??
2.正常组绿色荧光(蓝光激发)也能看见啊,这也太奇怪了吧,看染细胞核的时候,发现正常组hoechst33342染得细胞核也不亮啊,不是凋亡状态,细胞普通镜下观察看着也挺健康的,这是为什么呢?
有没有站友遇到过类似情况,可以讨论下,大佬们也可以多指点下小弟,感谢了~