DNA甲基化后续研究
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求助各位前辈
本人用某疾病样本及正常对照进行850K芯片分析，现在发现A基因甲基化在两组中有明显差异。
现在想进行A基因甲基化与疾病关系的研究
目前计划做的是：1.甲基化质粒转染细胞，验证甲基化水平对于基因表达的差异。2.用genecard找相关microRNA及下游蛋白，验证相关性。
问题：
1.A基因为启动子区域发生甲基化，进行质粒构建时是只需要将其启动子区域甲基化后进行转染吗？还是需要整条基因连接进行转染？
2.下游蛋白的验证可以通过WB，那么microRNA验证怎么进行，是否通过inhabitor等的转染验证？
3.因为现在手上没有原始疾病样本了，所以直接准备用质粒转染后的细胞来进行功能验证，这样有说服力吗？
麻烦各位前辈赐教了！
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