自杀质粒与缺失目的基因的上下同源臂融合片段反向连接，蔗糖筛选还能筛到双交换株吗？
发布于 2019-07-06 · 浏览 5826 · IP 四川四川
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本人用自杀质粒做基因敲除实验，先用PCR跑出敲除基因的上下游同源臂片段各700bp左右，再利用SOE-PCR 让上下同源臂融合在一起（1500bp），然后将自杀质粒载体与融合片段（1500bp）分别单酶切，连接、转化构建重组质粒，挑了4个重组质粒测序发现这四个重组质粒都是反向连接，最后要将重组质粒电转化，第一次同源重组筛选单交换菌，再利用蔗糖压力第二次同源重组筛选双交换菌，即敲除株，但是目前筛到7株抗生素敏感株，pcr鉴定发现均回复野生型了，请问反向连接对结果会有什么影响吗？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 5826
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