RAW264.7的TLR4跑WB做不出来，求各位大神指点

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这是我跑RAW264.7细胞TLR4调整对比度出来的图，下面是曝光好后丽春红染色.很奇怪的是在55Kd左右才有不明显的条带.

具体步骤如下:

1.用加了PMSF和磷酸酶抑制剂的碧云天RIPA(强)裂解的细胞

2.细胞每孔上样25ug

3.电泳转膜都没有问题(湿转250mA，2.5h，转完用考马斯验证转膜没问题)

4.BSA封闭1h

5.5%BSA配的一抗1:1000(CST的抗体兔抗鼠)，过夜4℃

6.第二天孵二抗1.5h(1:1000)(山羊抗兔)

7.加发光液后曝光6分钟调整对比度后得上图。