重组蛋白真核表达时CHO细胞株的选择

CHO细胞株是来自中华仓鼠卵巢细胞，现在早已被广泛用于科研用途和工业生产中，主要用于重组蛋白表达，例如抗体药物生产，或者特定蛋白细胞活性的研究。工业用的CHO细胞有多种类型和多种重组蛋白筛选策略，简析如下，欢迎专家补充，以便逐步完善，科学严谨。

根据细胞株筛选类型分类：

（一）利用二氢叶酸还原酶缺陷型（DHFR-）筛选 ，加压筛选试剂为甲氨喋呤（MTX，抗叶酸类抗肿瘤药），细胞株及来源有：

  DG44 （Thermo）  DUXB11（Chasin Lab）

（二）利用谷氨酰胺合成酶（GS）筛选，加压筛选试剂蛋氨酸亚氨基代砜（MSX，谷氨酰胺类似物） ，细胞株及来源有：

GS野生型，含弱的GS活性（GS WT）：  CHO-K1 （ATCC CCL-61，ECACC 85051005） CHOK1SV （lonza)

GS缺陷型，敲除GS活性（GS KO）： CHOK1SV-KO （Lonza)  CHOZN （Merk） HD-BIOP3(Horizon)

（三）其他筛选策略，如抗性筛选，新霉素抗性基因（G418），细胞株及来源有：

CHO-K1 (ATCC CCL-6，ECACC 85051005)

CHO-S  （Thermo) 

各类筛选策略的优缺点：

第一类、第二类在工业生产中都很常用。

其中第一类在2015年前常用，但稳定细胞株筛选周期长，超过半年时间，产量较低，（表达过程中稳定性较差--不准确），已较少使用。最出名的是DG44。

第二类由于基础专利已到期，现阶段十分受欢迎，稳定细胞株筛选周期短，一般少于3个月，产量较稳定，发酵过程中不用添加谷氨酰胺，能利用生物代谢产生的氨等。已明显优于第一类。但CHO缺陷型仍然有专利问题，授权成本很高。

CHO-K1是野生型细胞株，保存在美国和欧洲，CHOK1SV为CHO-K1悬浮驯化的来的无血清版本。

第三类在科研方面常用，直接用含有neo抗性基因的载体就可以筛选蛋白稳定细胞株。其中CHO-S 生物性状较CHO-k1良好，比如生长速度快，倍增一次只需20小时左右，细胞密度高等，可缩短发酵时间。

各中细胞系来源演进情况如下：