脐静脉内皮细胞培养建议

1.取样：脐带最好是没有取过脐带血的，长度一般在15－20cm.另外，脐带最好是刨腹产的，而且整个脐带不能有止血钳的夹痕。
2.运输：脐带最好要快速运输，主要可以用D-Hank's或培养基，还有其他和正常生理条件差不多的液体。
3.消化：此步骤是脐静脉内皮细胞培养最关键的一步，消化的酶我主要推荐Roche 的 Collagenase A，效果很不错；可以配制好后冻存使用。另外，最重要的是消化的时间，时间太短可能会损失一部分内皮细胞使其不能达到正常的生长密度而死亡；如果消化的时间太长又会引进一些杂细胞，如平滑肌细胞、纤维细胞等，这些都会影响内皮细胞的正常生长；我个人认为消化的时间要以脐带的长短而定，一般15－20cm的脐带大约需要10min,37度。
4.培养：脐带内皮细胞一般都培养在用1％明胶包被好的培养瓶中。原代用20％的小牛血清，以后就用10％的小牛血清。