SacB筛选问题
发布于 2018-11-14 · 浏览 5179 · IP 湖北湖北
这个帖子发布于 6 年零 185 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
小弟最近在用同源重组做基因敲除，SacB做负筛选标记，目前用10%的蔗糖平板筛。挑取平板上的单菌落划线移板后做菌落PCR，结果很奇怪。
第一张图是我用同源臂外面100bp左右的引物做的，有1300左右的条带证明敲除成功了。（但是也可以看2300左右的条带，这是野生型的结果）
第二张图是我用SacB基因内部的引物做的菌落PCR（750bp左右），仍然有条带，但条带很奇怪
老师说没有敲除成功，挑选出来的还是单交换的
但是SacB我测序过没有发生突变，它为什么能在10%的蔗糖板子上面长呢?而且PCR也显示有基因敲除成功的菌啊，难道二次交换发生在移板画线的过程中吗？做了两次都这个结果，想不通为什么。
那位大侠解释一下，传授点经验啊，小弟感激不尽
（研一的萌新，刚做同源重组实验，前面做的很顺手，这一步卡好久了
）
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 5179
11 2 点赞
