关于circRNA定量PCR检测的问题

circRNA引物设计好啦，sybr Green定量溶解曲线也是单峰，产物回收测序也显示是正确的。那么问题来啦，定量检测癌和癌旁的时候不知道为什么复孔之间的重复性很差，做了好几次都是这样，个人认为不是加样问题。请问各位大佬怎么处理的？做circRNA的cDNA需要特殊处理（比如RNase R）？还是需要什么步骤。万望大佬帮忙解答一下。