Nrf2一直跑不出来,但内参能出来,求各位指点
我买的是CST的抗体,分子量100左右,我的条件是:8%分离胶120V1h,5%浓缩胶80V15min,转膜,0.45pvdf膜,200mA2h
TBST洗膜3次,每次5分钟
一抗是cst兔抗4摄氏度孵育过夜
TBST洗膜3次,每次5分钟
荧光二抗孵育1h,TBST洗膜3次,每次5分钟
我用的新鲜组织蛋白,bca试剂盒测定蛋白浓度3到10mg/ml之间,分别跑胞浆胞核蛋白,胞浆胞核内参能跑出来,我的胞浆内参是贝塔actin,分子量43,胞核内参是laminB,分子量72,但是目的蛋白nrf2一直出不来,我用考马斯亮蓝染胶,目的蛋白的位置有条带,丽春红染膜,却染不出,连内参都染不上,对了,还有一个问题,我制胶的时候,加完分离胶用水压平,等胶凝固了,把水倒出来,胶会膨胀,请教各位什么原因.