胆管结扎（BDL）小鼠模型建立

       混迹丁香园已久，一直是索取多，奉献少。趁现在还有激情，把自己的一些实验心得写下来与大家共享，希望能给需要的人一些帮助！

       BDL模型是建立肝纤维化的一种经典模型。由于小鼠的体型较小，手术难度相对较高，很多刚接触这种建模方法的研究人员往往难以顺利完成手术，或者手术完成后因小鼠存活率低而影响后续实验。本科研狗主要从事肝脏纤维化方面的研究，目前积累了上百只BDL小鼠建模的经验，在此与各位交流一种小鼠BDL建模的方法，该方法的特点是建模成功率极高，术后小鼠的死亡率较低。

1.动物准备：一般选择4-8周龄雄性C57小鼠（对麻醉和手术的耐受性较好）。术前可禁食12小时。

2.动物麻醉：5%水合氯醛腹腔注射（按0.01ml麻药/g体重），待小鼠麻醉成功后，备皮，范围：上至胸骨柄，下至会阴，左右分别至腋前线或腋中线（个人经验：廉价的刮胡刀片在给小鼠备皮时非常好用）。

3.术前消毒：用胶带将小鼠固定于操作台上，如果操作台面为泡沫板等较为疏松的材料，也可以采用大头针固定四肢，但因使用大头针固定时对小鼠有一定的创伤，有时会影响麻醉效果。小鼠固定完成后以无菌棉球蘸取75%酒精，轻柔地消毒手术区域3次。

4.实施手术：在腹正中线、会阴上约1cm处，以眼科剪逐层剪开皮肤及肌肉等组织，向上开口至剑突上约0.5~1cm，以能暴露肝脏组织为宜。取2支无菌棉签，以生理盐水稍润湿后探入腹腔内，将肝叶、胃及部分肠管轻轻向右拨开，可观察到自肝门部位发出的与门脉伴行的透明胆管，继续向下可见胆管常附着于一小段肠管之上。以眼科镊轻柔钝性游离一小段胆管（约0.5cm），埋置2条6-0手术缝线并分别打手术结。线头留取长度不宜过短，约0.5cm即可。一般此时即可观察到胆管较结扎前轻微增粗。确认腹腔内无脏器损伤或出血后，以棉签轻轻复位肝叶、胃及肠管，6-0手术缝线逐层关腹，留取线头长度以0.3cm为宜。皮肤缝合完毕后以酒精棉球消毒切口1-2次，注意擦净切口处血渍。

5.术后护理：术后将小鼠置于干燥、温暖的环境中复苏。原则上术后不需要禁食禁水。

6.建模完成：在无其他干预手段的情况下，一般行胆管结扎手术14天后小鼠已有明显的纤维化形成。可以根据这个时间，选择恰当的干预条件进行实验。

 ·以上就是我采用的小鼠BDL建模方法，在实验时尚有几个小Tips可以让实验更加完美：

1.控制好麻醉剂量，切忌麻醉过量，小鼠对麻药的敏感性比大鼠要高，在麻醉时一定要控制好麻药剂量，有时甚至宁可稍稍麻醉不足，千万不要因为小鼠在备皮或准备开腹时出现轻微的躁动就草率地追加麻醉，这样很可能导致术后小鼠复苏时间大大延长，甚至死亡；

2.可在超净台内进行手术，手术环境做到相对无菌即可，但使用的手术器械等需要经过高压灭菌处理；

3.手术时开腹的位置应尽量准确，开腹范围应在保证手术操作能够顺利进行的情况下尽量小，从而减少创伤、缩短缝合时间、降低感染概率等；

4.腹腔探查并找寻胆管时，动作应轻柔，不要随意翻动组织，减少对肠管及其他脏器的牵拉并防止损伤脏器，游离胆管时务必动作仔细轻柔，切勿离断胆管；

5.术后缝合前务必确认没有内脏损伤、出血等，缝合要致密，不留死腔，结扎胆管及缝合选用的缝线均为6-0手术缝线，缝合针与缝线均较细，可以减少缝合时对小鼠的创伤；

6.手术时间（从开腹到完成皮肤缝合）尽量控制在15-20min之内，手术时间过长会降低小鼠的术后存活率；

7.术后复苏时应注意保暖。

 ·最后附几张BDL小鼠肝脏的图片，分别是对照组和模型组的肝脏大体观、HE染色、Masson染色。模型组BDL小鼠的造模时间为12天。在BDL模型小鼠可以看到明显肿大的胆囊、肝脏表面粗糙；HE和Masson染色也可以看到模型组小鼠的肝内炎症和纤维组织明显增生。希望各位实验顺利！