为什么CRISPR-CAS9 KO后western blot检测阳性
发布于 2017-03-07 · 浏览 1.5 万 · IP 浙江浙江
这个帖子发布于 8 年零 65 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位科研大神，我有个棘手的问题。我用CRISPR-CAS9技术 KO一个基因，采用的单Guide RNA的敲除方法，sgRNA位置选择在目的基因的2号外显子，单克隆测序选出十几个阳性克隆（测序双峰的克隆进一步TA克隆验证，移码突变者视为阳性克隆），但western验证始终阳性。怀疑是sgRNA位点选择的问题，于是在目的基因的中间区域13号外显子上又选择了一个sgRNA,但敲除后测序阳性克隆WB检测仍然为阳性。
我的WB抗体为多克隆抗体（目前不能买到单抗），目的蛋白家族性同源蛋白较多，其中有与目的蛋白的蛋白序列及大小高度相似的，所以抗体的原因可能性大吗？感觉我的操作过程没问题，大家感觉我的问题出在哪里呢？请各位多多赐教，不胜感激！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1.5 万
40 33 7
