抗体电荷异质性分析

目前上游给了一个单抗样品，浓度为1mg/ml左右。经过毛细管电泳分析其等电点在6.5左右。本人用 Waters Protein-Pak Hi Res CM, 4.6 x 100 mm, 7 μm 柱子进行电荷异质体分析，流动相A用的是20mM HAC-NaAC缓冲溶液，流动相B用的是含0.5M NaCl的A，进行线性洗脱，wash5分钟，然后进行线性洗脱30min 到100%B的流动相。做了不同PH值下的检测。具体如图：

有几个问题请教一下：

1）为什么在同一条件下，只出现两个峰，没有同时出现酸性峰，主峰，碱性峰。

2）为什么随着PH的改变，两峰的比例一直在变。比如在PH5.5时，有碱性峰，但随着PH的下降，原来的碱性峰变成了主峰，前面那个峰就相对变成的酸性峰，这种图谱合理吗？求同仁帮忙合理解释一下。谢谢！