肺间充质干细胞传代问题

本人目前在做肺间充质干细胞，可是每次细胞传代都会出现问题。我一般是传代时每瓶细胞加入400ul胰酶消化3-4min，然后加入培养液、吹打、1500转离心10分钟，收集细胞。原代传1代后细胞活力就不好了，长的特别慢，1代传2代细胞直接都死掉了，我是真不知道哪个环节出问题了啊。现在进实验室快仨月了，一点东西都没做出来，自己都没脸去见老板了。打算再买批老鼠，求大神帮助，提点一二，将不胜感激，以免再次失败。